百螢小課堂又給大家分享知識啦!今天給大家講解的內(nèi)容是關于細胞信號傳導。
在生物學中,細胞信號傳導是控制基本和復雜細胞過程的通信網(wǎng)絡。根據(jù)信號的性質(zhì),它可以分為生物化學信號或機械信號。生化信號由蛋白質(zhì)、脂質(zhì)、離子等生化分子產(chǎn)生。對這些生化試劑的檢測可以揭示該特定類型信號傳導途徑的狀態(tài)。
信號網(wǎng)絡的破壞通常會導致癌癥、Immunity病癥和代謝紊亂等病癥。通過了解信號通路,研究人員和臨床醫(yī)生也許能夠有效且高效的醫(yī)療病癥。AAT Bioquest提供廣泛的檢測方法,對涉及細胞信號傳導途徑的各種酶、蛋白質(zhì)或小分子進行經(jīng)濟有效的分析。靈敏度和重現(xiàn)性測量磷酸化、甲基化和乙?;然钚?。
1.二磷酸腺苷檢測
二磷酸腺苷(ADP)是一種重要的有機分子,在細胞代謝中發(fā)揮著重要作用。它是 ATP 去磷酸化的產(chǎn)物,ATP 去磷酸化是活細胞中能量轉(zhuǎn)移所必需的關鍵反應,并且可以通過再磷酸化再循環(huán)回 ATP。ADP 和 ATP 的這種相互轉(zhuǎn)化主要通過 ATP 酶(例如磷酸酶、磷酸化酶和激酶)在線粒體和葉綠體中發(fā)生。ADP 儲存在血小板內(nèi)的致密體中。當血小板被激活時,ADP 被釋放,與嘌呤能受體家族相互作用,從而調(diào)節(jié)細胞功能。
PhosphoWorks? 熒光 ADP 測定提供了一種監(jiān)測 ADP 形成的靈敏方法。在這種酶偶聯(lián)測定中,ADP 的形成是通過監(jiān)測激酶活性(由于它們的比例關系)來測量的。
圖1.ADP 劑量反應通過 PhosphoWorks? 熒光 ADP 檢測試劑盒(貨號 21655)在實心黑色 384 孔板中使用 Gemini 熒光酶標儀(Molecular Devices)進行測量。孵育 15、30 分鐘和 1 小時即可檢測低至 0.3 μM ADP(Z' 系數(shù) =0.65)。
表一.用于檢測ADP活性、形成或消耗的生化分析
2.三磷酸腺苷檢測
三磷酸腺苷(ATP)是一種復雜的有機分子,參與細胞能量生成、代謝調(diào)節(jié)和細胞信號傳導。它作為主要能量存在于所有生物體中,并且在沒有活生物體的情況下會迅速降解。因此,ATP測定是一種有用的工具,可用于各種研究應用,以識別活生物體。常見應用包括細胞活力和細胞毒性、表面**的檢測、水中**的檢測、培養(yǎng)中的體細胞以及食品質(zhì)量和污染檢測等。
我們的PhosphoWorks發(fā)光法ATP檢測提供了一種快速、簡單的生物發(fā)光法,可用于通過ATP檢測來確定哺乳動物細胞的細胞活力、細胞毒性和增殖。
圖2.使用PhosphoWorks發(fā)光法ATP檢測試劑盒(貨號21610)在96孔板上使用NOVOstar酶標儀(BMG Labtech)檢測ATP計量反應。
表二.用于檢測ATP活性、形成或消耗的試劑
3.環(huán)磷酸腺苷檢測
環(huán)磷酸腺苷 (cAMP) 是許多生物途徑中重要的二信使。它在許多生物體中用于細胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導,傳遞 cAMP 依賴性途徑,并參與蛋白激酶的激活和離子通道調(diào)節(jié)。cAMP 源自 ATP,由質(zhì)膜結(jié)合的腺苷酸環(huán)化酶合成,該酶與跨膜受體偶聯(lián)。腺苷酸環(huán)化酶的激活是由一系列信號分子啟動的。這些分子與GPCR等受體相互作用,啟動腺苷酸環(huán)化酶活性并增加細胞內(nèi) cAMP 水平。cAMP 激活 cAMP 依賴性蛋白激酶,負責磷酸化特定底物蛋白。cAMP 活性的測定可用于評估受體激活、受體表征和受體-配體鑒定的功能測定。
圖3.使用Screen Quest比色法ELISA cAMP檢測試劑盒(Cat#36370)在帶有SpectraMax酶標儀的透明96孔板中檢測cAMP計量反應。
表3.用于檢測G蛋白偶聯(lián)受體系統(tǒng)中腺苷酸環(huán)化酶活性