一.百螢 鏈霉親和素-Xtra IF488綴合物概述
鏈霉親和素綴合物廣泛用于和生物素綴合物結(jié)合以檢測(cè)多種生物靶標(biāo)，例如蛋白質(zhì)，核酸和其他分子。它們被用作許多生物檢測(cè)的理想選擇，例如免yi熒光顯微鏡，流式細(xì)胞術(shù)，蛋白質(zhì)印跡和其他生物應(yīng)用，因?yàn)殒溍褂H和素具有很強(qiáng)的親和力結(jié)合生物素，在廣泛的pH和溫度范圍內(nèi)都不會(huì)受到影響。AAT Bioquest®提供多種標(biāo)記有經(jīng)典熒光染料的鏈霉親和素偶聯(lián)物（例如：FITC，TRITC，TexasRed®，Cy3®，Cy5®和Cy7®），以及我們優(yōu)異的水溶性，光穩(wěn)定性iFluor 和mFluor 染料。然而，常規(guī)的生物素-親和素檢測(cè)系統(tǒng)仍然受到現(xiàn)有熒光綴合物有限信號(hào)強(qiáng)度的限制。鏈霉親和素Xtra iFluor綴合物是超亮鏈霉親和素綴合物的新家族，其激發(fā)和發(fā)射性能與Alexa Fluor熒光團(tuán)幾乎相同，信號(hào)增強(qiáng)了3到5倍。它是在細(xì)胞成像或流式細(xì)胞儀中檢測(cè)低豐度靶標(biāo)的一組強(qiáng)大工具。iFluor 488是FITC通道成像中常見的綠色熒光色之一。
二.百螢 鏈霉親和素-Xtra IF488綴合物參數(shù)
Ex(nm) 491
Em(nm) 516
分子量 ~52000
溶劑 Water
存儲(chǔ)條件 在-15℃以下保存，避光防潮
三.百螢 鏈霉親和素-Xtra IF488綴合物適用儀器
流式細(xì)胞儀
Ex: 488nm
Em: 530/30nm
通道: FITC通道
熒光顯微鏡
Ex: FITC濾波片組
Em: FITC濾波片組
通道: 黑色透明底板
四.百螢 鏈霉親和素-Xtra IF488綴合物實(shí)驗(yàn)方案
溶液配制
1.儲(chǔ)備溶液配制
所有未使用的儲(chǔ)備溶液應(yīng)分為一次性使用的等分試樣，并在制備后儲(chǔ)存在-20°C下。 避免重復(fù)凍融循環(huán)。
鏈霉親和素-Xtra 儲(chǔ)備溶液（1 mg / mL）：加入100 uL的Cat＃46000和1 mL的Cat＃46001的ddH2O，制成1mg/mL的儲(chǔ)備溶液。注意：此重組溶液在4°C儲(chǔ)存并避光保存后，可穩(wěn)定保存6個(gè)月而無明顯變化。為了更長的存儲(chǔ)時(shí)間，可以將重構(gòu)的溶液分成單次使用的等分試樣，或者不分裝添加等體積的甘油（濃度為50％），然后將溶液存儲(chǔ)在-20°C（避光）。
2.工作溶液配制
鏈霉親和素-Xtra 工作溶液：對(duì)于IF，建議的染色濃度為1-5 ug / ml。對(duì)于FACS，建議在染色濃度為0.1-0.5 ug / 100 uL /百萬細(xì)胞。注意： PBS + 0.1％BSA可用作染色緩沖液。 注意：為了獲得每種應(yīng)用的性能，需要仔細(xì)確定該試劑的濃度。注意： 建議的工作稀釋度僅供參考，建議用戶在測(cè)試中使用適當(dāng)?shù)年栃院完幮詫?duì)照對(duì)產(chǎn)品進(jìn)行滴定。
樣品示例及操作
1. 按照說明書中的建議用目標(biāo)抗體封閉和處理樣品。
2. 在樣品中以適當(dāng)?shù)臐舛群统掷m(xù)時(shí)間添加生物素偶聯(lián)的二抗工作溶液。注意：請(qǐng)驗(yàn)證您的生物素偶聯(lián)抗體與實(shí)驗(yàn)中使用的一抗的相容性和類型。例如，如果一抗是小鼠抗體，則與生物素結(jié)合的山羊抗小鼠抗體可用于該測(cè)定。
3. 在室溫下用鏈霉親和素-Xtra 工作溶液孵育細(xì)胞30分鐘至1小時(shí)。 注意： 孵育的時(shí)間需要仔細(xì)確定。
4. 取出工作溶液，然后將細(xì)胞重懸在緩沖液中。
5. 使用熒光顯微鏡拍攝圖像或使用流式細(xì)胞儀記錄強(qiáng)度。
圖示：
圖1.用鏈霉親和素-Xtra iFluor 綴合物和鏈霉親和素Alexa Fluor 綴合物染色的Hela細(xì)胞圖像對(duì)比。Hela細(xì)胞用4％多聚甲醛固定30分鐘，用0.02％Triton X-100透化10分鐘，并用1％BSA封閉1小時(shí)。然后將固定的Hela細(xì)胞在室溫下用1 μg / mLα微管蛋白小鼠單克隆抗體染色1小時(shí)，然后用GxM IgG-生物素（Cat#16729）染色，然后用Streptavidin-Xtra iFluor 488和Streptavidin-Alexa Fluor 488染色.細(xì)胞核用Hoechst 33342（藍(lán)色，Cat#17535）染色。