轉(zhuǎn)移酶是一類催化特定官能團(tuán)(例如甲基或糖基)從供體分子轉(zhuǎn)移到受體分子的酶。它們參與無數(shù)重要的細(xì)胞過程,包括硫羥酸酯的轉(zhuǎn)移、色氨酸的代謝和丙酮酸脫氫酶 (PDH) 的調(diào)節(jié)。轉(zhuǎn)移酶主要根據(jù)轉(zhuǎn)移的生化基團(tuán)的類型進(jìn)行分類,共有10大類,包括400多種獨(dú)特的酶。
常見的分類包括:
甲基轉(zhuǎn)移酶和甲酰基轉(zhuǎn)移酶 - 轉(zhuǎn)移單碳基團(tuán)甲基 (-CH3) 和甲?;?(-CHO) 基團(tuán)的酶
轉(zhuǎn)酮酶和轉(zhuǎn)醛醇酶 - 轉(zhuǎn)移酮或醛基的酶
氧化氨基轉(zhuǎn)移酶或轉(zhuǎn)氨酶 - 轉(zhuǎn)移含氮基團(tuán)的酶
磺基轉(zhuǎn)移酶 - 轉(zhuǎn)移含硫基團(tuán)的酶
丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶
丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT),也稱為血清谷氨酸丙酮酸轉(zhuǎn)氨酶(GPT),催化丙氨酸和谷氨酸之間α-氨基的可逆轉(zhuǎn)移,是氨基酸代謝中的重要酶。ALT 主要存在于肝臟以及心臟、肌肉和腎臟中,但含量要低得多。在健康受試者中,血清 ALT 水平相對較低。然而,當(dāng)細(xì)胞受損時(shí),例如在急性和慢性肝炎、阻塞性黃疸、肝癌、心肌梗塞期間,ALT 會泄漏到血流中,導(dǎo)致血清 ALT 水平增加。因此,血清ALT水平的檢查具有重要的臨床和診斷意義。
Amlite 熒光丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶檢測
Amlite 熒光丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶檢測試劑盒(貨號13802)提供了一種快速、靈敏的方法來檢查各種生物樣品中的 ALT 濃度。通過酶偶聯(lián)反應(yīng)循環(huán)產(chǎn)生紅色熒光產(chǎn)物來檢查產(chǎn)物谷氨酸??梢允褂脽晒饷笜?biāo)儀在 Ex/Em = 530-570 / 590-600 nm(佳 Ex/Em = 540 / 590 nm)讀取信號。使用 Amlite 熒光丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶檢測試劑盒,在 100 μL 反應(yīng)體積中檢測到低至 4 mU/mL 的 ALT。該測定是穩(wěn)定的,可以很容易地適應(yīng)各種應(yīng)用。
圖1. 使用 Gemini 熒光酶標(biāo)儀在 96 孔黑色板中使用 Amlite 熒光丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶檢測試劑盒(貨號 13802)檢查ALT 劑量反應(yīng)。
Part.2
Amlite 比色丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶檢測
也可以使用 Amlite 比色丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶檢測試劑盒(貨號 13803)通過酶偶聯(lián)反應(yīng)循環(huán)產(chǎn)生藍(lán)色產(chǎn)物來檢測產(chǎn)物谷氨酸??梢允褂梦舛让笜?biāo)儀在 ~575 nm 或通過 A570 nm 與 A610 nm 的吸光度比讀取信號,以提高檢測靈敏度。使用 Amlite 比色丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶檢測試劑盒,可在 100 μL 反應(yīng)體積中檢測到低至 10 mU/mL 的 ALT。
圖2. ALT 劑量反應(yīng)是使用 SpectraMax 酶標(biāo)儀(Molecular Devices)在 96 孔白色透明底板中使用 Amlite 比色丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶檢測試劑盒(貨號 13803)進(jìn)行檢測。
Part.3
天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶
天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST),也稱為血清谷氨酸草酰乙酸轉(zhuǎn)氨酶(GOT),催化天冬氨酸和谷氨酸之間α-氨基的可逆轉(zhuǎn)移,是氨基酸代謝中的重要酶。AST 主要存在于肝臟、心臟、肌肉、腎臟和大腦等組織中。在健康受試者中,血清 AST 水平相對較低。然而,當(dāng)細(xì)胞受損時(shí),例如在急性和慢性肝炎、阻塞性黃疸、肝癌、心肌梗塞期間,AST會泄漏到血流中,導(dǎo)致血清 AST 水平增加。因此,血清AST水平的檢測具有重要的臨床和診斷意義。
Amlite 熒光天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶檢測
Amlite 熒光天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶 (AST) 檢測試劑盒(貨號 13800)提供了一種快速、靈敏的方法來檢測各種生物樣品中的 AST 濃度。L-谷氨酸產(chǎn)物是通過酶偶聯(lián)反應(yīng)循環(huán)產(chǎn)生紅色熒光產(chǎn)物來檢測的。信號可由熒光酶標(biāo)儀在 Ex/Em = 530-570 / 590-600 nm(佳 Ex/Em = 540 / 590 nm)讀取。使用 Amlite 熒光天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶檢測試劑盒,100 μL 反應(yīng)體積中的 AST 低至 2 mU/mL。該檢測是穩(wěn)定的,可以很容易地適應(yīng)各種應(yīng)用。
圖3. 使用 Gemini 熒光酶標(biāo)儀在 96 孔黑色板中使用 Amlite 熒光天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶檢測試劑盒(貨號 13800)檢測AST 劑量反應(yīng)。
Part.4
Amlite 比色天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶檢測
也可以使用 Amlite 比色天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶檢測試劑盒(貨號 13801)通過酶偶聯(lián)反應(yīng)循環(huán)產(chǎn)生藍(lán)色產(chǎn)物來檢測產(chǎn)物谷氨酸??梢允褂梦舛让笜?biāo)儀在 ~575 nm 或通過 A570 nm 與 A610 nm 的吸光度比讀取信號,以提高檢測靈敏度。使用 Amlite 比色天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶檢測試劑盒,在 100 μL 反應(yīng)體積中檢測到低至 3 mU/mL 的 AST。
圖4. AST 劑量反應(yīng)是使用 SpectraMax 酶標(biāo)儀(Molecular Devices)在 96 孔白色、透明底板中使用 Amlite 比色天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶檢測試劑盒(貨號 13801)進(jìn)行檢測。
Part.5
HDAC 活性測定
組蛋白去乙?;?/span> (HDAC) 是一類從組蛋白上的 ε-N-乙酰賴氨酸氨基酸中去除乙?;拿?。脫乙酰作用恢復(fù)賴氨酸的正電荷,從而增加組蛋白對 DNA 帶負(fù)電荷的磷酸骨架的親和力。該過程通常通過阻斷轉(zhuǎn)錄因子的通路來下調(diào) DNA 轉(zhuǎn)錄。正在研究 HDAC 抑制劑作為癌癥的**方法。
Amlite 熒光 HDAC 活性測定
Amlite 熒光 HDAC 活性檢測試劑盒(貨號13601)為檢測 HDAC 活性提供了一種快速、方便且靈敏的方法。該試劑盒使用我們的非肽 HDAC Green 底物,該底物比傳統(tǒng)的基于肽的 HDAC 底物(如 Ac-RGK(Ac)-R110、Ac-RGK(Ac)-AMC 和 Ac-RGK(Ac)-AFC)敏感得多 . 此外,HDAC Green 底物也比其他商業(yè)肽基 HDAC 底物更耐蛋白酶水解。我們的試劑盒可用于檢測細(xì)胞裂解物中的 HDAC 活性或使用細(xì)胞提取物或純化酶篩選 HDAC 抑制劑。HDAC Green 底物的長波長發(fā)射使分析較少受到化合物和細(xì)胞成分的干擾。HDAC 活性通過 490 nm 激發(fā)和 525 nm 發(fā)射進(jìn)行檢測。
圖5. 使用 Amplite 熒光 HDAC 活性檢測試劑盒(藍(lán)色)分別與供應(yīng)商 X(紅色)和供應(yīng)商 Y(綠色)檢測HeLa 核提取物中的 HDAC 活性, 使用 Amlite 熒光 HDAC 活性檢測試劑盒檢測的 HDAC 活性的信號/背景比比供應(yīng)商 X 和 Y 高 10 倍以上。
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