今天百螢生物為您介紹D-熒光素使用中的常見(jiàn)問(wèn)題
1、D-熒光素適合做哪些實(shí)驗(yàn)?
D-熒光素鉀鹽和5-氟-熒光素，作為L(zhǎng)uciferase的作用底物，常用于以下實(shí)驗(yàn)：
1. 報(bào)告基因分析
2. In vivo imaging (動(dòng)物活體成像)
3. In vitro imaging (細(xì)胞體外分析)
4. ATP測(cè)定
5. 其它luciferase及其基因相關(guān)的分析和研究工作
2、D-熒光素應(yīng)用于活體成像的基本原理
細(xì)胞中D-熒光素酶參與的化學(xué)發(fā)光反應(yīng)遵守酶促反應(yīng)的基本原理，在底物D-熒光素鉀過(guò)量的情況下，反應(yīng)產(chǎn)生的光子數(shù)（發(fā)光量）與細(xì)胞中的D-熒光素酶的量成正相關(guān)，從而可以推算出細(xì)胞的數(shù)量。
3、D-熒光素鉀鹽溶液的穩(wěn)定性
D-熒光素鉀鹽易溶于水和緩沖液，溶解度可高達(dá)25mg/mL。一般使用濃度為3-15 mg/mL。
溶液的pH值、溶液中的氧氣和保存時(shí)間對(duì)其保存過(guò)程中的穩(wěn)定性非常重要。當(dāng)溶液的pH<6.5（發(fā)生水解作用）或>7.5（發(fā)生消旋化作用，D型轉(zhuǎn)化為L(zhǎng)型）的情況下，D-熒光素鉀鹽相對(duì)不穩(wěn)定。如果溶液中存在少量的氧氣，將加速D-熒光素鉀的降解速度。
D-熒光素配成溶液后，在佳的保存條件（-80°C，佳pH，無(wú)氧氣）下，存在固定的降解速度：0.2%/天，因此配成溶液保存的D-熒光素應(yīng)盡量在1年內(nèi)使用完。
有水存在的情況下，主要發(fā)生消旋化作用，即D-熒光素轉(zhuǎn)化成L-熒光素，有報(bào)道稱L-熒光素對(duì)熒光素酶催化的酶促反應(yīng)有抑制作用。
4、D-熒光素、D-熒光素鈉和D-熒光素鉀之間的區(qū)別
主要區(qū)別在于溶解和分散性能。D-熒光素鉀鹽在水和緩沖液中的溶解度高，且溶解速度較快，故在一般的生物學(xué)試驗(yàn)中常用D-熒光素鉀鹽。
5、D-熒光素鉀鹽的保存和運(yùn)輸條件
保存條件：≤-20°C，避光，保持干燥。（在不打開(kāi)包裝的條件下，可保存兩年時(shí)間）。
運(yùn)輸條件：高純度的D-熒光素鉀鹽可在短時(shí)間內(nèi)常溫條件下保存，運(yùn)輸條件為常溫。
原裝（沒(méi)有打開(kāi)包裝）熒光素的包裝瓶中充有氬氣，保證其穩(wěn)定性，打開(kāi)包裝后，請(qǐng)嚴(yán)格按照保存條件保存。
D-熒光素鉀鹽具有易溶于水的特性，其暴露于空氣中，易吸潮。在稱量過(guò)程中，請(qǐng)考慮其易吸潮的特性，先進(jìn)行溫度平衡，再快速稱取。
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