13.在實(shí)驗(yàn)中OD值太高,怎么解決?
答:可以縮短加入CCK-8后的培養(yǎng)時(shí)間。例如:可以把加入CCK-8試劑后的培養(yǎng)時(shí)間由2小時(shí)縮短為1小時(shí)。此外,可適當(dāng)減少細(xì)胞的數(shù)量。
14.如果OD值太低,怎么解決?
答:可以采取2個(gè)辦法:1、適當(dāng)增加細(xì)胞數(shù)量 2、延長加入CCK-8試劑后的反應(yīng)時(shí)間。
15.應(yīng)該每次做標(biāo)準(zhǔn)曲線嗎?
答:建議每次做。雖然細(xì)胞是一樣的,但是細(xì)胞的狀態(tài)不一定一樣。對于狀態(tài)不一樣的細(xì)胞,建議每次做標(biāo)準(zhǔn)曲線。
16.在cck-8顯色過程中,如何終止反應(yīng)
答:有以下幾種方法(96孔板):
(1) 在顯色反應(yīng)后,將培養(yǎng)板放置4°冰箱內(nèi);
(2) 每孔加入10ul 0.1M HCL溶液。
(3) 每孔加入10ul 1%(w/v)的SDS溶液。注:反應(yīng)停止后,應(yīng)在24h內(nèi)測定
17.如何減少由于CCK-8試劑在孔壁上的殘留所帶來的誤差
答:可以在加樣前用培養(yǎng)基稀釋CCK-8試劑并混勻后加樣
18.好用的 CCK-8 試劑盒推薦?
答:百螢生物生產(chǎn)的 Cell Counting Kit-8(CCK-8)細(xì)胞活力檢測試劑盒已廣泛用于生物活性因子的活性檢測,抗腫瘤**的篩選,細(xì)胞增殖的測定,細(xì)胞毒性檢測以及藥敏等與細(xì)胞活性和增殖相關(guān)的實(shí)驗(yàn)
19.如何使用CCK-8進(jìn)行細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)?
答:通常,使用CCK-8進(jìn)行細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)的步驟如下:
(1)將需要測定增殖能力的細(xì)胞均勻懸浮在培養(yǎng)基中,并將其分配到孔板或培養(yǎng)皿中。
(2)在每個(gè)孔中加入CCK-8試劑,并確保試劑均勻分布。
(3)將孔板或培養(yǎng)皿放回培養(yǎng)箱中,進(jìn)行一定時(shí)間的培養(yǎng),使細(xì)胞與試劑發(fā)生反應(yīng)。
(4)反應(yīng)結(jié)束后,使用吸光度計(jì)測量吸光度,并根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線或控制組進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,得出細(xì)胞增殖能力的相對值。
20.CCK-8試劑盒的優(yōu)點(diǎn)是什么?
答:(1)高靈敏度:CCK-8試劑可以對低細(xì)胞數(shù)進(jìn)行檢測,因此對于罕見細(xì)胞或稀釋的細(xì)胞樣品非常有用。
(2)快速操作:CCK-8試劑盒提供了一種快速而簡便的方法來評估細(xì)胞的增殖情況,通常只需幾個(gè)小時(shí)即可得到結(jié)果。
(3)可行性高:CCK-8試劑盒對各種細(xì)胞類型都具有較好的適用性,可應(yīng)用于多種細(xì)胞培養(yǎng)條件和實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)。
21.有沒有CCK-8及與其他細(xì)胞增殖檢測試劑的特性對比?
答:圖中提供了多種用于檢測細(xì)胞增殖的方法、對比,供參考
22.CCK-8試劑盒是否有副作用?
答:CCK-8試劑盒是一種常用的細(xì)胞增殖檢測試劑,通常在細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中使用,并且已被廣泛驗(yàn)證和接受。一般情況下,正確使用CCK-8試劑盒不會對細(xì)胞產(chǎn)生明顯的副作用。CCK-8試劑本身對細(xì)胞具有較低的毒性。它是一種水溶性試劑,主要由WST-8(水溶性四氧化三氮唑鹽)和電子媒介體1-Methoxy PMS(促進(jìn)電子傳遞)組成。
在CCK-8試劑中,WST-8可被細(xì)胞內(nèi)的代謝活性還原為橙色的水溶性產(chǎn)物,該產(chǎn)物在細(xì)胞外可通過光學(xué)密度測量進(jìn)行定量檢測。1-Methoxy PMS作為電子媒介體,促進(jìn)WST-8的還原反應(yīng)。
當(dāng)CCK-8試劑與細(xì)胞接觸時(shí),其影響對細(xì)胞的影響主要來自WST-8的還原產(chǎn)物。在適當(dāng)?shù)臐舛认?,CCK-8試劑對細(xì)胞的生長和代謝活性影響較小,并不會對細(xì)胞造成明顯的毒性。
然而,值得注意的是,對于特定的細(xì)胞類型或?qū)嶒?yàn)條件,可能需要根據(jù)實(shí)際情況進(jìn)行優(yōu)化和驗(yàn)證。此外,在使用CCK-8試劑時(shí),建議遵循相關(guān)的操作規(guī)程和**指南,確保**操作和正確解讀實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
23.CCK-8在實(shí)驗(yàn)時(shí),每孔應(yīng)該接種多少細(xì)胞?
答:針對標(biāo)準(zhǔn)96孔板,貼壁細(xì)胞的*小接種量為1000個(gè)/孔 (100μl培養(yǎng)基)。若為白細(xì)胞,接種量不低于2500個(gè)/孔 (100μl培養(yǎng)基)。如若使用24孔板或6孔板,應(yīng)預(yù)先計(jì)算每孔相應(yīng)的接種量,并按照每孔培養(yǎng)基總體積的10%加入CCK-8溶液。
以上是百螢整理的CCK-8試劑盒的問題以及解答,大家可以做為參考。