基本信息
貨號：22200（5mg）
儲存條件：-20℃避光防潮
簡介
JC-1廣泛用于通過流式細(xì)胞術(shù)確定線粒體膜電位。它能夠選擇性地進(jìn)入線粒體，并且隨著線粒體膜電位的增加（超過約80-100mV的值）可逆地將其顏色從綠色變?yōu)槌壬?。這種性質(zhì)是由于線粒體膜極化后JC-1聚集體的可逆形成導(dǎo)致發(fā)射光從530nm（即JC-1單體形式的發(fā)射）轉(zhuǎn)變?yōu)?/span>590nm（即J-聚集形式的發(fā)射） 。當(dāng)在490 nm處激發(fā)時(shí)，隨著線粒體膜變得更多，JC-1的顏色從綠色到橙色可逆地變化偏振。使用通常安裝在所有流式細(xì)胞儀中的過濾器可以檢測兩種顏色。可以在熒光通道1（FL1）和通道2（FL2）中的綠橙發(fā)射中分析綠色發(fā)射。使用JC-1的主要優(yōu)點(diǎn)是它可以提供定性信息，考慮到從綠色到橙色熒光發(fā)射的轉(zhuǎn)變，以及定量信息，考慮到純熒光強(qiáng)度，可以在FL1和FL2通道中檢測到。除了廣泛用于流式細(xì)胞儀外，JC-1還用于熒光成像。我們已經(jīng)開發(fā)出一種在熒光微孔板平臺中使用它的方案。盡管JC-1在許多實(shí)驗(yàn)室中被廣泛使用，但其水溶性差使得它在某些應(yīng)用中難以使用。我們的JC-10具有比JC-1更好的水溶性，并且JC-10在一些細(xì)胞系中甚至具有優(yōu)于JC-1的性能。
物理化學(xué)特性
分子量：652.23
儲存方式：DMSO
Ex=515nm
Em=529nm和590nm
JC-1染色細(xì)胞分析
簡要概括
使用測試化合物制備細(xì)胞®
添加JC-1工作溶液（96孔板100μL/孔或384孔板25μL/孔）®
室溫或37 ℃孵育1小時(shí)®
移除JC-1工作 解決方案®
讀取Ex / Em = 490/525 nm和490/590 nm處的熒光強(qiáng)度
注意：以下是我們推薦的活細(xì)胞方案。 該協(xié)議僅提供指南，應(yīng)根據(jù)您的特定需求進(jìn)行修改。
操作步驟
1.準(zhǔn)備JC-1工作解決方案：
1.1在高質(zhì)量無水DMSO中制備2至10 mM JC-1的儲備液。 應(yīng)及時(shí)使用原液; 任何剩余的溶液應(yīng)等分并在<-20℃冷凍。
注意：避免反復(fù)凍融循環(huán)，避免光照。
1.2制備1X JC-1工作溶液：在實(shí)驗(yàn)當(dāng)天，將JC-1固體溶解在DMSO中或?qū)⒌确莸腏C-1儲備溶液解凍至室溫。 在Hanks和20 mM Hepes緩沖液（HHBS）或您選擇的緩沖液（pH 7）和0.02％Pluronic®F-127中制備10至30μM1XJC-1工作溶液。 通過votexing很好地混合它們。
注意：JC-1不溶于水，因此它打算在溶液中聚集。 建議在將JC-1工作溶液加載到池中之前對其進(jìn)行過濾。
2.用熒光酶標(biāo)儀進(jìn)行JC-1檢測：
2.1用測試化合物處理細(xì)胞一段所需的時(shí)間（例如，Jurkat細(xì)胞可以用喜樹堿處理4-6小時(shí)）以誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。 對于空白孔（沒有細(xì)胞的培養(yǎng)基），加入相應(yīng)量的化合物緩沖液。
2.2將100μL/孔/ 96孔板或25μL/孔/ 384孔板的JC-1工作溶液（來自步驟1.2）加入細(xì)胞板中。
2.3將JC-1加載板在37℃，5％CO2培養(yǎng)箱中孵育15-60分鐘。
注意：適當(dāng)?shù)姆跤龝r(shí)間取決于所使用的單個細(xì)胞類型和細(xì)胞濃度。優(yōu)化每個實(shí)驗(yàn)的孵育時(shí)間。
2.4從平板上取下JC-1工作溶液，用HHBS或您選擇的緩沖液清洗細(xì)胞。 將100μL/孔/ 96孔板或25μL/孔/ 384孔HHBS板加回到細(xì)胞板中。
2.5監(jiān)測Ex / Em = 490/525 nm和490/590 nm處的熒光變化，進(jìn)行比率分析。
3.用熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀進(jìn)行JC-1測定：
3.1用測試化合物處理細(xì)胞一段所需的時(shí)間（例如，Jurkat細(xì)胞可以用喜樹堿處理4-6小時(shí)）以誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。
3.2離心細(xì)胞，每管取1-5×105個細(xì)胞。
3.3將細(xì)胞重懸于500μLJC-1工作溶液中（來自步驟1.2）。
3.4在室溫或37°C孵育10至30分鐘，避光。
3.5用您選擇的HHBS或緩沖液清洗細(xì)胞。 將細(xì)胞重懸于500μLHHBS中以獲得每管1-5×10 5個細(xì)胞。
3.6使用熒光顯微鏡（使用FITC和TRITC濾光片）或流式細(xì)胞儀（使用FL1和FL2通道）監(jiān)測Ex / Em = 490/525 nm和490/590 nm處的熒光變化。