DiBAC4(3)鈣離子熒光探針是一種細胞膜電位敏感的親脂性陰離子熒光染料，DIBAC4(3)本身無熒光，當進人細胞與胞漿內(nèi)的蛋白質(zhì)結(jié)合后才發(fā)出熒光，DIBAC4(3)鈣離子熒光探針進入細胞，細胞內(nèi)熒光強度增加，即膜電位增加表示細胞去極化；反之，細胞內(nèi)熒光強度降低即膜電位降低表示細胞超極化。DiBAC4(3)鈣離子熒光探針是目前*常用的線粒體膜電位檢測熒光探針。
1、過程概述
用于細胞內(nèi)鈣離子檢測時，F(xiàn)luo-3 AM的常用濃度為5μM。通常用含有5μM的Fluo-3 AM的適當溶液和細胞一起在37℃孵育30-60分鐘進行熒光探針裝載，隨后適當洗滌，洗滌后可以考慮適當再孵育20-30分鐘以確保Fluo-3 AM在細胞內(nèi)完全轉(zhuǎn)變成Fluo-3。然后在流式細胞儀上進行檢測。
2、Fluo-3AM使用液的配置
100ug的Fluo-3AM，分子量是1219.9。按實際需要的摩爾濃度折算，無水DMSO溶解。一般配置成1~5mM的DMSO儲存液。如出現(xiàn)難溶現(xiàn)象，可以用20%的F127的DMSO溶液助溶。
注意事項：
1、熒光染料有淬滅問題，應盡量避光保存；
2、實驗時注意個人防護，戴手套、口罩；
應用舉例
2、貯存液的配制（5000μM/L）
按照說明書，計算0.1mg 的摩爾數(shù)為0.089μM ，則需加DMSO18uL，微量加樣器反復吹打混勻后分裝，按說明書要求避光-20度冰凍保存。